Имунохистохимия за диагностика на лимфом

Резюме

Имунохистохимията е техника, която използва взаимодействия антиген-антитяло за откриване на специфични протеини в клетките. Тази техника има няколко основни приложения в диагностиката на лимфома, включително идентифициране на клетъчната линия и фазата на съзряване, откриване на специфични генетични промени, визуализиране на степента на клетъчна пролиферация и идентифициране на терапевтични цели. Някои конкретни примери са:

CD3 е всеобхватен (пан) Т-клетъчен маркер, експресиран върху повечето зрели Т/NK-клетъчни лимфоми, с изключение на анапластичния едроклетъчен лимфом, докато CD20 е пан В-клетъчен маркер, който се експресира върху повечето зрели В-клетъчни лимфоми.

CD79a може да бъде добра алтернатива на CD20, компенсирайки загубата му при изменение на туморни клетки или използване на ритуксимаб. CD56, невроендокринен маркер, се използва като NK клетъчен маркер при диагностицирането на лимфома.

Характерни транслокации (генетична промяна, при която част от една хромозома се откъсва и се прикрепя към друга хромозома), възникващи при фоликуларен лимфом (BCL2) и мантелноклетъчен лимфом (CCND1), могат да бъдат открити чрез свръхекспресия на Bcl-2 и циклин D-1 съответно в имунохистохимията.

Ki-67 отразява степента на пролиферация на туморни клетки (колко бързо се делят клетките). С развитието на имунотерапията, няколко антитела срещу маркери като лиганд на програмирана смърт 1 (PD-L1), CD19 и CD30 са използвани като биомаркери за идентифициране на терапевтични цели. От решаващо значение е правилното фиксиране на пробите за получаване на точни имунохистохимични резултати. Следователно, всички процеси, от събирането на тъкан до крайната патологична диагноза, трябва да се извършват по подходящ начин за точна диагноза на лимфома.

Въведение

Имунохистохимията (ИХХ) е от съществено значение при диагностицирането на лимфома, тъй като лимфоцитният тип (В или Т клетка) е неразличим върху оцветените слайдове. Тази техника обикновено се прилага за диагностика на лимфома поради следните причини:

1. 1. могат да се идентифицират клетъчната линия и фазата на съзряване,
   2. могат да се открият специфични генетични изменения,
   3. може да се визуализира степента на клетъчна пролиферация и
   4. могат да се идентифицират терапевтичните цели.

Маркерите могат да се използват за различни цели в зависимост от ситуацията и вида на тумора. В тази статия ще подобрим разбирането на читателите за резултатите от ИХХ в докладите за патология.

Панел за дифузен В-едроклетъчен лимфом (DLBCL) и неговите варианти:

В настоящата класификация на СЗО на тумори на хемопоетични и лимфоидни тъкани дифузният едър В-клетъчен лимфом (DLBCL) се състои от DLBCL, неуточнен по друг начин (DLBCL NOS) и различни специфични варианти. Типичните резултати от ИХХ на DLBCL NOS се характеризират с големи, атипични CD3- (негативни) и CD20+ (позитивни) лимфоцити с индекс Ki-67 над 80%.

Освен това класификацията на клетката на произход (COO) се извършва чрез оцветяване за CD10, Bcl-6 и MUM-1.

Техният фенотип с двоен експресор (т.н. двойно ударен лимфом) се проверява чрез оцветяване за Bcl-2 и c-myc. Освен това, оцветяването с in situ хибридизация на вируса на Ебщайн-Бар (EBV ISH) помага при откриването на EBV-позитивен DLBCL.

Ето например как изглеждат едни слайдове с оцветени различни протеини.

Панели за дребни / нискостепенни B-клетъчни лимфоми :

Няма подходящ термин, който да описва групата на зрели B-клетъчни лимфоми и те не могат да бъдат класифицирани като DLBCL или неговите варианти. Това се дължи на факта, че всички дребноклетъчни лимфоми не могат да се считат за нискостепенни лимфоми, а „дребноклетъчен B-клетъчен лимфом“ може да се обърка с „дребноклетъчен лимфоцитен лимфом“. За удобство в този преглед се използва термина „дребноклетъчни/нискостепенни B-клетъчни лимфоми“.

Четирите най-основни диференциални диагнози на дребноклетъчния/нискостепенен B-клетъчен лимфом са фоликуларен лимфом, хронична лимфоцитна левкемия/дребноклетъчен лимфом (ХЛЛ/ДЛЛ), мантелноклетъчен лимфом (МКЛ) и маргинално-зонов лимфом (МЗЛ).

 Фоликуларният лимфом е разпознаваем патологично с коекспресията (едновременно експресиране) на CD10 и Bcl-2. Съществуват няколко малки/нискостепенни B-клетъчни лимфома, при които се експресират както CD10, така и Bcl-2; те не включват фоликуларен лимфом.

Един от най-трудните аспекти на диагностицирането на фоликуларния лимфом е, че значителен брой от тези лимфоми имат фоликуларна архитектура (групират се във фоликули) без CD10 експресия. По-специално, колкото по-висок е класът на фоликуларния лимфом, толкова по-висок е процентът на CD10 негативност. Това води до трудности при патологичната диагноза. Ако тестът за дребноклетъчен/нискостепенен В-клетъчен лимфом е CD10-отрицателен и Bcl-2-позитивен, то трябва да се търси друга диференциална диагноза.

Индексът на маркиране Ki-67 (за колко бързо се делят клетките, т.е колкото по-висок е, толкова по-агресивен е ракът) при фоликуларен лимфом е общоприето като <20% при нискостепенен (степени 1 и 2) и >30% при високостепенен (степени 3A и 3B); при все това обаче, индексът на маркиране Ki-67 не се използва самостоятелно за класифициране.

При ХЛЛ/ДЛЛ най-характерните находки от имунохистохимията са, че тези туморни клетки са CD3-негативни и CD20-позитивни, и че CD5 и CD23 се коекспресират в туморните клетки. CD5 първоначално е Т-клетъчен маркер и тъй като реактивните Т-клетки са смесени в туморните области на почти всички B-клетъчни лимфоми, е важно да се определи дали CD5 се оцветява в дифузен модел за диагностициране на ХЛЛ/ДЛЛ. Въпреки че експресията на CD23 е силно чувствителна при ХЛЛ/ДЛЛ, тя може да се експресира и в други малки/нискостепенни B-клетъчни лимфоми. Следователно е рисковано да се диагностицира ХЛЛ/ДЛЛ единствено въз основа на експресията на CD23.

Най-важните маркери за диагностициране на МКЛ (мантелноклетъчен лимфом) са CD5 и циклин D-1. Циклин D-1 е високоспецифичен маркер за МКЛ. Понякога има циклин D-1-отрицателни МКЛ и в такива случаи SOX11 оцветяването може да помогне при диагностицирането. Моноклоналният SOX11 показва чувствителност и специфичност, сравними с тази на циклин D-1 в МКЛ; следователно, SOX11 често се използва като първичен маркер за диференциране на МКЛ. Индексът Ki-67 може да варира в МКЛ.

За разлика от други B-клетъчни лимфоми, които се класифицират като ДЕБКЛ след трансформация на едрите клетки, МКЛ се диагностицира диференциално дори след високостепенна трансформация. Бластоидните и плеоморфните варианти са високостепенни варианти на МКЛ, където индексът на маркиране Ki-67 е толкова висок, колкото този в ДЕБКЛ.

Липсата на специфични ИХХ маркери или генетични промени в туморните клетки на нодални или екстранодални МЗЛ представлява сериозен проблем при тяхната диагностика. Следователно, често се диагностицира, когато другите лимфоми са изключени, т.е. когато туморът е дребен B-клетъчен лимфом и всички туморни клетки са отрицателни за CD10, CD5, CD23, циклин D-1 и SOX11 маркери.

Някои изследователи се противопоставят на използването на МЗЛ като „диагноза на кошчето за боклук“, както е описано по-горе, но няма друга дефинирана категория, която може да съдържа тези случаи, освен споменатата категория МЗЛ съгласно настоящата класификация на СЗО.

Панели за T/NK клетъчни лимфоми :

Въпреки че настоящата класификация на СЗО изброява много различни видове Т/NK-клетъчни лимфоми, първата стъпка в диференциалната диагноза е класифицирането му в периферен Т-клетъчен лимфом, неуточнен (PTCL NOS), ангиоимунобластен Т-клетъчен лимфом (AITL), анапластичен едроклетъчен лимфом (ALCL) и екстранодален NK/T-клетъчен лимфом, назален тип (ENKTL).

 Въпреки че анапластичен едроклетъчен лимфом (ALCL) е Т-клетъчен лимфом, CD3 пан-Т-клетъчният маркер обикновено е отрицателен. За разлика от него, CD30 показва силна, дифузна позитивност. По този начин, въз основа на ALK оцветяването, положителните и отрицателните резултати се класифицират съответно като ALK-позитивен и ALK-отрицателен ALCL.

Тъй като CD3 не се експресира в ALK-отрицателен ALCL, за диагностициране на ALCL са необходими допълнителни доказателства за Т-клетъчния произход на тумора. За тази цел се използват допълнителни Т-клетъчни маркери като CD2, CD5 и CD7, и цитотоксични гранулни маркери като TIA-1 и гранзим B.

Поставянето на диагноза ангиоимунобластен Т-клетъчен лимфом (AITL) единствено въз основа на отрицателното или положителното имунооцветяване на маркерите в пробата често е трудна. Освен това, тъй като туморните клетки не образуват дифузен листов модел, понякога е трудно да бъдат разпознати като Т-клетъчен лимфом само с модели на оцветяване на CD3 и CD20. Туморните клетки на AITL са CD4 положителни и CD8 отрицателни, тъй като са клетъчни лимфоми на Т-фоликуларен помощник (TFH). Вярваме, че CD21 е най-важният ИХХ маркер за диагнозата AITL.

Надеждна диагноза екстранодален NK/T-клетъчен лимфом, назален тип (ENKTL) може да бъде постигната, ако EBV ISH е включен във всички панели за T/NK-клетъчни лимфоми. В ENKTL туморните клетки са положителни за EBV ISH в почти всички случаи. EBV (Ебщайн-Бар вирус) може да заразява само В клетки и епителни клетки, но не може да влезе в T/NK клетки. По този начин, ако Т клетките или NK клетките са положителни за EBV ISH, той може да се счита за T/NK-клетъчен лимфопролиферативно разстройство.

Повечето туморни клетки на ENKTL са положителни (понякога слабо) за оцветяване на CD3. В зависимост от клетъчната линия, CD56 може или не може да бъде изразен. Когато плътността на туморните клетки е изключително ниска, е трудно да се определи дали EBV-позитивните клетки са В клетки или Т клетки (туморни клетки). В такива случаи линията на EBV-позитивните клетки трябва да бъде идентифицирана чрез двойно оцветяване, сдвояване на EBV ISH-CD3 и EBV ISH-CD20 (или CD79A).

Периферен Т-клетъчен лимфом, неуточнен по друг начин (PTCL NOS) включва всички останали периферни Т-клетъчни лимфоми, с изключение на специфичните типове, споменати по-горе. Туморните клетки са CD3-позитивни и това оцветяване подчертава цитологичната атипия на лимфоцитите, по-добре от оцветяването на H&E. Следователно е необходимо да се провери дали е налице цитологична атипия при наблюдение на оцветените с CD3 слайдове. За това в институтите трябва да се извършват проверки за контрол на качеството на имунооцветяващите техники.

Панели за лимфом на Ходжкин :

 Лимфом на Ходжкин е широко класифициран в няколко подварианта: класическия лимфом на Hodgkin (CHL), нодуларен с лимфоцитно-преобладаване (NLPHL) и още 3 варианта. Алгоритъмът за диагностика препоръчва първоначален панел ИХХ за диагностика на CHL и допълнително оцветяване за диагностициране на NLPHL, ако възможността за CHL е изключена.

CHL туморните клетки имат характерна морфология (клетки на Hodgkin-Reed-Sternberg или HRS клетки). В ИХХ туморните клетки силно експресират CD30. Освен това, CD20 е отрицателен, а PAX5 е слабо положителен за тези клетки. Оцветяването с CD30 има изключително висока чувствителност, така че може да се каже, че CD30 е положителен в почти всички CHL туморни клетки.

Понякога обаче интензивността на CD30 не е силна; Следователно, при тълкуването на тези случаи е необходимо предпазливост. Въпреки че CD15 е по -малко чувствителен от CD30, CHL може да бъде диагностициран, когато CD30 и CD15 се експресират в една и съща туморна проба. Точността на експресията на CD15 в HRS клетките трябва да бъде изчерпателно изследвана, тъй като CD15 често е положителен за малки гранулоцити в тумори. Положителността на EBV варира в зависимост от варианта на CHL и тези резултати не влияят на диагнозата.

Заключение

Оцветяването при имунохистохимията е от съществено значение за диагностицирането на различни лимфоми. От съществено значение е патолозите да изберат подходящи маркери според клиничната ситуация на пациента, резултатите от оцветяването и точно да интерпретират резултатите от ИХХ за оптимална диагноза на лимфома. Следователно, клиницистите трябва да събират достатъчно проби и да ги фиксират правилно, за да получат точни резултати от ИХХ, които биха помогнали за окончателна, надеждна патологична диагноза.

Източник на статията: https://doi.org/10.5045/br.2022.2022037 , достъпена и преведена през 06.2025.